斑马鱼模型研究二十味肺病丸的抗PM2.5作用的实验模型及方法

目前，对于二十五味肺病丸的研究主要集中在对肺部疾病的治疗作用，而对于防治PM2.5对机体的损害作者尚未见报道。本实验使用斑马鱼诱导多种实验动物模型，纳米活性炭模拟 PM2.5颗粒物，水溶性给予二十五味肺病丸干预，探究二十味肺病丸的抗 PM2.5作用。

具体实验模型与方法：

1. 巨噬细胞吞噬功能评价模型

随机选取 120 尾黑色素等位基因突变型 Albino品系斑马鱼，静脉注射( iv) 给予纳米活性炭建立斑马鱼巨噬细胞吞噬功能评价模型。水溶给予二十五味肺病丸处理 2 d 后，加入中性红溶液对斑马鱼进行活体染色，染色结束后统计吞噬了纳米活性炭的巨噬细胞数量( N) ，以巨噬细胞吞噬促进率来评价二十五味肺病丸对斑马鱼体内巨噬细胞吞噬功能的影响。

2. 肠道功能改善评价模型

随机选取 120 尾黑色素等位基因突变型 Albino品系斑马鱼，肌内注射( im)  给予纳米活性炭建立斑马鱼纳米活性炭分泌进入肠道功能评价模型，水溶给予二十五味肺病丸处理 5 d 后，统计体内纳米活性炭分泌进入肠道的斑马鱼数量( Z) ，评价二十五味肺病丸对纳米活性炭分泌进入肠道功能的影响。

3. 肠道蠕动功能评价模型

随机选取 120 尾野生型 AB 品系斑马鱼，水溶给予尼罗红 16 h 建立斑马鱼肠蠕动评价模型。水溶给予二十五味肺病丸处理 6 h 后，每组随机取 10 尾斑马鱼在荧光显微镜下观察斑马鱼肠腔中荧光染料信号强度、拍照并保存图片，用尼康 NIS-Elements D 3． 10 高级图像处理软件进行图像分析，计算斑马鱼肠腔荧光染料信号强度( S) 进行定量分析，评价二十五味肺病丸促进肠道蠕动功能。

4. 斑马鱼炎症消退模型

随机选取 120 尾转基因中性粒细胞荧光斑马鱼，分别水溶给予二十五味肺病丸和阳性对照药吲哚美辛。药物处理 1 h 后，卵黄囊注射脂多糖建立斑马鱼炎症模型，然后再分别水溶给予二十五味肺病丸和阳性对照药吲哚美辛干预。药物再处理 2 h 后，分别统计斑马鱼卵黄囊内中性粒细胞个数( N) ， 以炎症消退率来评价二十五味肺病丸的抗炎症作用。

药物浓度与模型数量: 二十五味肺病丸浓度为13.9，41.7 和 125 μg·mL，吲哚美辛 60 μmol·L，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔( 实验组) 均处理 30 尾斑马鱼，每孔容量为 3 mL。